انواع الکتروفورز

انواع مختلفی از ژل ها معمولاً به عنوان محیط پشتیبانی الکتروفورز استفاده می شوند و بسته به اینکه کدام یک مفیدتر باشد ممکن است به شکل صفحه یا لوله باشد.

صفحات ژل امکان اجرای همزمان بسیاری از نمونه ها را فراهم می کنند و به همین دلیل اغلب در آزمایشگاه ها مورد استفاده قرار می گیرند.سکوبندی آزمایشگاهی با این حال ، ژل های لوله ای تفکیک بهتری از نتایج را ارائه می دهند ، بنابراین اغلب برای الکتروفورز پروتئین انتخاب می شوند.

ژل آگارز معمولاً برای الکتروفورز DNA استفاده می شود. این یک ساختار منافذ بزرگ است که به مولکول های بزرگتر اجازه می دهد تا به راحتی حرکت کنند اما برای توالی مولکول های کوچکتر مناسب نیست.

الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید (PAGE) وضوح بیشتری نسبت به ژل آگارز دارد و آن را برای تجزیه و تحلیل کمی مناسب تر می کند. این امر امکان شناسایی چگونگی اتصال پروتئین به DNA را فراهم می کند. همچنین می تواند برای درک چگونگی مقاومت باکتریها در برابر آنتی بیوتیک ها از طریق تجزیه و تحلیل پلاسمیدها مورد استفاده قرار گیرد.

الکتروفورز D2 مولکول ها را در امتداد یک محور x و یک محور y جدا می کند – یکی از آنها را با بار و دیگری را با اندازه جدا می کند.

چگونه قطعات DNA از طریق ژل حرکت می کنند؟

هنگامی که ژل در الکتروفورز قرار گرفت ، هر یک از نمونه های DNA که می خواهیم بررسی کنیم (به عنوان مثال ، هر واکنش PCR یا هر پلاسمید هضم شده با محدودیت) با دقت به یکی از چاه ها منتقل می شود. یک چاه مخصوص نردبان DNA است ، یک مرجع استاندارد که شامل قطعات DNA با طول مشخص است. نردبان های تجاری DNA در اندازه های مختلفی قرار دارند ، بنابراین ما می خواهیم یکی از “پوشش” خوب دامنه اندازه قطعات مورد انتظار خود را انتخاب کنیم.

بعد ، برق جعبه ژل روشن می شود و جریان از طریق ژل شروع می شود. مولکول های DNA به دلیل وجود گروه های فسفات در ستون فقرات قند-فسفات ، بار منفی دارند ، بنابراین آنها از طریق ماتریس ژل به سمت قطب مثبت حرکت می کنند. هنگامی که برق روشن شده و جریان از ژل عبور می کند ، گفته می شود که ژل در حال کار است.

مراحل اجرای الکتروفورز:

نمونه های DNA در انتهای الکترود منفی ژل در چاه ها بارگیری می شوند.

برق روشن شده و قطعات DNA از طریق ژل (به سمت الکترود مثبت) مهاجرت می کنند.

پس از اجرای ژل ، قطعات متناسب با اندازه از هم جدا می شوند. بزرگترین قطعات نزدیک بالای ژل هستند (الکترود منفی ، جایی که آنها شروع شده اند) و کوچکترین قطعات نزدیک قسمت پایین (الکترود مثبت) هستند.